Niveaux anormaux d'anticorps contre la rougeole, les oreillons, la rubéole et les maladies auto-immunes du système nerveux central (SNC) chez les enfants autistes
Journal de la science biométrique
Singh VK, Lin SX, Newell E, Nelson C.
2002
Abstract
Maladies auto-immunes du système nerveux central (SNC), en particulier contre protéine basique de myéline (MBP), pourrait avoir un rôle causal dans l'autisme, un trouble neurologique du développement. Étant donné que de nombreux enfants autistes ont des niveaux élevés d'anticorps contre la rougeole, nous avons mené une étude sérologique des auto-anticorps rougeole-oreillons-rubéole et du système nerveux central. En utilisant des échantillons de sérum provenant de 125 enfants autistes et 92 échantillons de contrôle, les anticorps ont été analysés par test ELISA1 et analyse par immunotransfert (immunofixation) 2. Les tests ELISA ont démontré une augmentation significative des niveaux d'anticorps MPR chez les enfants autistes. Les analyses d'immunofixation ont révélé la présence d'un anticorps MPR inhabituel dans 75 des 125 sérums d'enfants autistes (60%) et aucun dans le groupe témoin. Cet anticorps était spécifique contre la protéine 73-75 kD de MPR. Cette protéine, analysée avec des anticorps monoclonaux, était immunopositive contre la protéine H de la rougeole, appelée hémagglutinine3, mais pas contre les nucléoprotéines de la rougeole et contre les protéines virales de la rubéole et des oreillons. Par conséquent, l'anticorps MPR dans le sérum des enfants autistes identifie la protéine H de la rougeole, qui est spécifique à la sous-unité vaccinale. De plus, plus de 90% des sérums d'enfants autistes positifs pour les anticorps contre la MPR étaient également positifs pour les auto-anticorps dirigés contre la protéine basique de la myéline (MBP), suggérant une forte association entre la MPR et les maladies auto-immunes du système nerveux central dans l'autisme. Ces preuves impliquent qu'une réponse inappropriée au vaccin MPR, en particulier dans la composante rougeole, pourrait être liée à la pathogenèse de l'autisme.
Introduction
L'autisme est un trouble du développement du système nerveux central à développement précoce, dont l'étiologie et la pathogenèse sont inconnues. Le trouble provoque de graves déficits des fonctions mentales supérieures supérieures telles que l'interaction sociale, le langage, la communication, l'imagination et les capacités cognitives. Bien que l'autisme affecte plus d'un demi-million d'Américains et encore plus dans le monde, on en sait peu sur l'étiologie et la pathogenèse du trouble. Les théories contemporaines incluent les facteurs génétiques, immunologiques, environnementaux et neurologiques, ainsi que d'autres facteurs non identifiés. Partant de la régulation immunitaire défectueuse chez les enfants autistes [10, 12, 16, 21, 23 [, une attention a été portée au mécanisme auto-immun de la pathogenèse de l'autisme [14-17, 19, 20]. Comme les maladies auto-immunes sont généralement suspectées d'être déclenchées par des virus, des investigations sérologiques ont récemment été menées pour la détection de virus dans l'autisme [15, 17]. De nombreux enfants autistes se sont révélés avoir des niveaux élevés d'anticorps contre le virus de la rougeole (MV), mais pas contre l'herpèsvirus humain de type 6 (HHV-6), le cytomégalovirus ou le virus de la rubéole (RV) . De plus, le niveau élevé d'anticorps contre la rougeole était fortement associé à la présence d'auto-anticorps cérébraux, ce qui nous a conduit à postuler une association pathogénétique entre le virus de la rougeole et l'auto-immunité présente dans l'autisme [15, 17]. Pour déterminer plus en détail l'origine de cette infection rougeoleuse, nous avons étudié la possibilité d'une réponse anticorps excessive ou inappropriée au vaccin MPR en relation avec les maladies auto-immunes du système nerveux central (SNC). Comme décrit ici, plusieurs enfants autistes ont des niveaux inhabituels d'anticorps MPR et montrent une association temporelle avec des auto-anticorps contre la protéine de base de la myéline (MBP) qui a été utilisée comme marqueur d'auto-immunité du SNC dans l'autisme.
Méthodes et matériel
Nous avons mené une étude en laboratoire sur les anticorps MPR et les autoanticorps MBP dans les sérums d'enfants autistes et d'un groupe témoin. Cette étude étant une extension de nos recherches en cours, nous avons utilisé des échantillons de sérum préalablement collectés et cryoconservés à une température de -20 ° C [14-17]. L'étude a porté sur un total de 217 enfants: 125 enfants autistes (âgés de 4 à 10 ans) et 92 dans le groupe témoin (dont 58 enfants normaux entre 5 et 13 ans, 6 frères ou sœurs normaux de 6 à 9 ans et 28 enfants âgés de 4 à 12 ans qui présentaient d'autres troubles du comportement ne relevant pas du spectre autistique). Les résultats des analyses immunologiques ont montré que tous les enfants avaient été vaccinés contre le MPR mais aucun n'avait eu de cas de rush cutané ou d'infection par un virus sauvage. Le diagnostic clinique de l'autisme avait été établi essentiellement selon les normes DSM-IIIR, établies par l'American Association of Psychiatrists, Washington, DC, USA, comme décrit précédemment [14–17]. L'étude n'a impliqué que des enfants avec un diagnostic d'autisme établi. Le comité d'éthique a examiné et approuvé notre protocole de recherche qui comprenait l'utilisation d'échantillons de sérum humain uniquement. Lors de la collecte des échantillons de sang ou pendant au moins deux semaines avant la collecte, aucun des patients autistes ni du groupe témoin n'a dû prendre de médicaments tels que des antipsychotiques ou des médicaments neuroleptiques. Les anticorps MPR ont été initialement recherchés par un dosage immuno-absorbant lié à une enzyme (test ELISA) pour la titration sérique, mais par la suite ils ont été recherchés par analyse d'immunofixation pour cribler le sérum. Dans les deux méthodes d'analyse, le vaccin MPR-II (Merck, West Point, Pa., USA) a été utilisé comme antigène. Les autoanticorps contre la protéine basique de la myéline (MBP) (Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY, USA) ont été étudiés par analyse d'immunofixation comme routine dans notre laboratoire. Tous les tests immunologiques ont été effectués en interne (au sein du laboratoire), pour des raisons liées simplement à la nature particulière de l'étude et parce qu'ils ne sont actuellement disponibles auprès d'aucune source disponible dans le commerce.
La recherche d'anticorps MPR par ELISA a été menée sur la base de recherches antérieures menées par nos soins en utilisant cette méthode [18]. En bref, les micropuits d'une plaque de microtitrage Costar (Corning, Corning, NY, USA) ont été revêtus avec l'antigène MPR dissous dans une solution saline tampon phosphate4 à ph 7,4. La plaque a été lavée trois fois avec 0,05% de tampon PBF-tween. 100 µl / puits de tampon phosphate salin ont été pipetés dans les micropuits blancs5 ou du sérum humain prédilué en quatre dilutions dans les micropuits de test. La plaque a été incubée à température ambiante pendant une heure. Après trois lavages avec du tampon PBF-Tween, 100 ul / puits d'IgG anti-humaine de chèvre conjuguée à de la phosphatase alcaline et dilués à 1: 500 (Sigma, St. Louis, MO, USA) ont été pipetés. La plaque a été incubée à température ambiante pendant une heure puis lavée à nouveau trois fois. Ensuite, une quantité de 100 ul / puits d'une solution de substrat (1 mg / ml de p-nitrophénylphosphate dans 50 mM de tampon de bicarbonate de sodium, pH 9.6, contenant 1 mM de chlorure de magnésium) a été ajoutée. La réaction colorée a été arrêtée avec 20 pl / puits de NaOH 1 N et la plaque a été lue à 405 nm en utilisant un modèle de Microplate Reader 3550 (Bio-Rad, Richmond, Californie, USA). Après avoir soustrait le blanc, les lectures d'absorbance ont été converties en unités arbitraires EIA, Enzyme ImmunoAssay: Enzyme Immunoassay (0.01 DO = 1 unité EIA).
L'analyse d'immunofixation a été initialement réalisée selon la méthode publiée par nous (17-20), en utilisant MPR ou MBP (Major basic protein) comme criblage d'antigènes et de protéines pré-colorées (précolorées) standard (Bio -Rad). En bref, les protéines ont été séparées en une solution de gel prête à l'emploi à 12% (Bio-Rad) par électrophorèse en utilisant du gel de polyacrylamide (PAGE) et du dodécyl sulfate de sodium (SDS)6. Ils ont ensuite été transférés sur des membranes de nitrocellulose en utilisant la technique du double sandwich, puis bloqués avec 1% d'albumine de sérum bovin dans un tampon salin tris (TBS: solution saline tamponnée Tris). Les membranes ont été séchées à l'air et placées à température ambiante.
Pour les tests immunologiques, de petits buvards de 3-4 mm de diamètre ont été incubés pendant une heure avec du sérum dilué de manière appropriée de patients autistes ou témoins. Après quatre lavages avec du TBST (tampon tris salin contenant 0,05% de Tween-20), les buvards ont été incubés pendant une heure avec des immunoglobulines polyvalentes anti-IgG de chèvre conjuguées en phosphatase alcaline (alcaline phosphatase conjuguée de phosphatase de chèvre anti-polyvalente humaine) immunoglobulines) (Sigma). Après quatre lavages avec TBST, les buvards ont été développés dans une solution de substrat selon les instructions du fabricant du kit de substrat AP (Phosphatase alcaline) (Bio-Rad). La réaction n'était considérée comme positive que si la bande bleu-violet était affichée. Dans certaines expériences, la présence de protéines virales dans les transferts MPR a été détectée par le biais d'anticorps monoclonaux dirigés contre l'hémagglutinine MV (HA), la nucléoprotéine MV-NP, RV ou MuV (Chemicon International, Temecula, Californie, États-Unis), suivis par immuno-recherche par phosphatase alcaline de chèvre anti-IgG de souris; pour tous les autres tests, les conditions ci-dessus ont été reproduites. Afin de déterminer le poids moléculaire, nous avons effectué simultanément des protéines standard SDSPAGE pré-colorées (Bio-Rad) avec de la myosine incluse (207 kD), de la ß-galactosidase (121 kD), de l'albumine sérique bovine (81 kD), de l'ovalbumine (51.2 kD ), le dioxyde de carbone (33.6 kD), l'inhibiteur de la rhizine de soja (28.6 kD), le lysozyme (21.1 kD) et l'aprotinine (7.5 kD).
Résultats
Tout d'abord, il est important de souligner que nous avons choisi le MPR comme antigène pour le dépistage simplement parce que c'est l'antigène immunisant lorsque les enfants sont vaccinés avec le MPR. Par conséquent, les anticorps dirigés contre la MPR seront une mesure exacte de la conversion sérique de ce vaccin tri- ou polyvalent, au lieu des anticorps dirigés contre les protéines virales de la rougeole, des oreillons ou de la rubéole qui sont utilisés individuellement pour mesurer la sérologie virale dans la pratique courante. Initialement, pour étudier les effets du sérum dilué, le niveau d'anticorps MPR a été mesuré par des tests ELISA sur des sérums de 24 enfants autistes, 14 enfants normaux et 16 autres enfants ayant des problèmes au-delà de l'autisme. Le résultat du test ELISA sur les taux d'anticorps MPR sériques est résumé dans la figure 1.
Fig. 1 Détection d'anticorps MPR par test ELISA. Les niveaux d'anticorps MPR sont indiqués en fonction de la dilution du sérum pour les enfants autistes (n = 24, cercles dans la ligne supérieure), les enfants normaux (n = 14, carrés dans la ligne centrale) et les enfants avec autres problèmes de santé (n = 16, triangles, en bout de ligne). Statistiquement, comme évalué par le test de l'élève, le niveau d'anticorps MPR est beaucoup plus élevé chez les enfants autistes. Les données sont exprimées par l'erreur standard ± (erreur standard SE).
Les enfants autistes, dont le sérum a été testé à diverses dilutions, avaient un niveau d'anticorps MPR significativement plus élevé que les enfants normaux et ceux ayant d'autres problèmes. Le pic le plus élevé (plus de sept fois) a été observé à une dilution 1:50 de sérum autistique. La méthode ELISA a été principalement utilisée pour déterminer une dilution appropriée du sérum, qui a ensuite été évaluée à 1:50. Par la suite, tous les sérums ont été analysés à cette dilution par l'analyse d'immunofixation, car cette méthode permet l'analyse des protéines auxquelles les anticorps sont liés, ce qui était l'objectif principal de la présente étude.
L'analyse d'immunofixation de tous les 217 sérums a révélé que 75 des 125 sérums autistiques, contre aucun des 92 sérums témoins, avaient des anticorps contre MPR et MBP. Comme le montre la figure 2, les sérums autistes ont eu une réaction immunopositive à une bande protéique de 73-75 kD dans le transfert MPR (fig.2, ligne B) tandis que le sérum témoin n'a pas eu cette réaction (fig.2, ligne A); aucune autre bande protéique n'était immunopositive dans cette analyse. De plus, la même bande protéique dans les transferts MPR a eu une réaction immunopositive aux anticorps monoclonaux MV-HA (fig. 3, ligne gauche) mais pas aux anticorps monoclonaux MV-NP (fig. 3, ligne droite). Les transferts MPR étaient immunonégatifs vis-à-vis des anticorps monoclonaux RV ou MuV (figure 4). Conformément aux études précédentes [5, 15, 19, 20], les sérums autistiques contenaient des auto-anticorps MBP de 18,5 à 20 kD (figure 2, ligne D), que le poids moléculaire du cerveau bovin MBP utilisé dans la présente étude. Les sérums de contrôle étaient négatifs pour les auto-anticorps MBP (figure 2, ligne C).
Sur la base d'analyses d'immunofixation, nous avons constaté que 75 des 125 (60%) des enfants autistes étaient positifs pour les anticorps MPR tandis que 70 des 125 (56%) enfants autistes avaient des auto-anticorps MBP (fig. 5). Aucun de ces deux types d'anticorps n'a été détecté dans le groupe témoin (enfants en bonne santé ou avec d'autres types de maladies). De plus, selon les données de nos analyses d'immunofixation, le groupe d'enfants autistes a trouvé une corrélation intéressante entre les anticorps MPR et les autoanticorps MBP, c'est-à-dire que plus de 90% des sérums autistes positifs aux anticorps MPR étaient également positifs aux autoanticorps MBP (fig.5 ). Cette corrélation était absente dans le groupe témoin car les enfants de ce groupe étaient négatifs pour les anticorps MPR et les auto-anticorps MBP.
Figue. 2. Immunoblots représentatifs des anticorps MPR et des autoanticorps MBP. Comme décrit dans le texte, les protéines dans les spots MPR et MBP ont été incubées avec du sérum autistique ou témoin et testées avec des immunoglobulines polyvalentes anti-humaines caprines conjuguées avec de la phosphatase alcaline. Notez que les sérums autistes (pistes B et D), mais pas les sérums témoins (pistes A et C), ont montré des réactions positives aux anticorps avec une protéine de 73 à 75 kD dans la coloration MPR et une protéine 18,5, 20 à 12 kD dans le spot MBP, respectivement. Dans le gel à 17,5% d'acrylamide, la bande de protéines MPR (Rf = 16,4 mm) a migré légèrement plus rapidement que l'albumine sérique bovine (Rf = 161 mm) par rapport aux autres normes protéiques préemballées (Cat. No. 0318-XNUMX, Bio-Rad).
Figue. 3. Les immunoblots MPR représentatifs ont réagi avec des anticorps monoclonaux dirigés contre les protéines MV. Dans ce but, les taches MPR ont été incubées séparément avec deux dilutions (1: 100 et 1:50) d'anticorps monoclonaux MV-HA ou d'anticorps monoclonaux MV-NP et détectées avec de la phosphatase alcaline de chèvre anti-souris-IgG. Notez que l'anticorps monoclonal MV-HA (pistes A et B), mais pas l'anticorps monoclonal MV-NP (pistes C et D), a montré une réaction immunopositive avec une bande de 73 à 75 kD de la coloration MPR.
Figue. 4. Les immunoblots représentatifs de MPR ont réagi avec des anticorps monoclonaux dirigés contre RV ou MuV. Des spots MPR de 4 sessions SDSPAGE distinctes ont été incubés avec des anticorps monoclonaux (dilution 1: 100) à RV ou MuV et détectés avec de la phosphatase alcaline de chèvre anti-IgG de souris. Notez que les taches MPR étaient négatives dans ces immunoessais.
Figue. 5. Distribution des anticorps MPR et MBP chez les enfants autistes et témoins. Après criblage des anticorps par immunotransfert, le pourcentage de sérums positifs aux anticorps a été calculé dans chaque groupe d'étude. Cela a été établi par rapport à la source d'antigène testée. Notez que seul le groupe autiste a montré des réactions positives (barres verticales) mais le groupe témoin qui comprenait des enfants normaux (boîte de base 1), des frères et sœurs normaux (boîte de base 2) et des enfants atteints d'autres maladies (boîte de base 3) c'était négatif.
Discussion
Plusieurs études à travers le monde ont suggéré que des facteurs immunitaires tels que l'auto-immunité pourraient jouer un rôle fondamental dans la pathogenèse de l'autisme [10, 12, 14-17, 19, 20]. Il existe des preuves de facteurs de sensibilité immunogénétique [24] et de regroupement familial des maladies auto-immunes dans les familles avec enfants autistes [4]. Les enfants autistes présentent de nombreuses anomalies immunitaires: augmentation des IgG3 sériques [16], diminution des IgA sériques [7,12], diminution du nombre et des fonctions des lymphocytes, en particulier des cellules T auxiliaires (CD4 +) et des cellules tueuses naturelles (NK) [10, 12, 21, 23] et une augmentation des taux plasmatiques de cytokines auto-immunes spécifiques telles que l'interleukine-2, l'interleukine-12 et l'interféron-gamma [4]. L'augmentation de la fréquence de certains facteurs immunogénétiques (allèle nul C4B, haplotype étendu B44-SC30-DR4 et région HLA-DRb1 hypervariable) a également été montrée chez certains enfants autistes [24]. De nombreux enfants autistes ont des auto-anticorps spécifiques à un organe, en particulier des auto-anticorps dirigés contre la protéine MBP dérivée de la myéline du cerveau [15, 17, 19, 20]. De plus, un nombre considérable d'enfants autistes présentent des améliorations significatives des caractéristiques autistiques lorsqu'ils sont traités par immunothérapie, comme l'autoantigène oral [15], l'immunoglobuline intraveineuse [7] ou le facteur de transfert [5]. Collectivement, ces anomalies immunitaires et / ou thérapies immunitaires sont compatibles avec une base auto-immune de pathogenèse dans l'autisme.
Les virus sont généralement associés aux maladies auto-immunes, malgré le manque de preuves expérimentales. Le mécanisme de déclenchement de l'auto-immunité dans l'autisme est inconnu mais des associations virales ont été décrites [2, 8]. Les enfants autistes ont une valeur significativement plus élevée que les niveaux normaux d'anticorps contre la rougeole, mais pas les anticorps anti-HHV-6, rubéole ou cytomégalovirus [15, 17]. L'augmentation spécifique du niveau d'anticorps contre la rougeole était également compatible avec une association sérologique entre MV et auto-immunité dans l'autisme, ce qui nous a conduit à postuler un lien étiologique entre MV et autisme [15, 17]. Comme indiqué ici, une augmentation significative du niveau d'anticorps MPR a été trouvée chez les enfants autistes. De plus, l'anticorps MPR a montré une réaction immunopositive à une protéine de 73 à 75 kD de MPR chez 60% des enfants autistes de l'étude. Il s'agissait d'un résultat important car le poids moléculaire de la protéine MPR qui réagissait positivement aux anticorps MPR ressemblait au poids moléculaire d'une protéine de la rougeole connue sous le nom d'antigène HA. En fait, la bande MPR contenait l'antigène MV-HA car elle était immunopositive pour les anticorps monoclonaux dirigés contre MV-HA, mais pas pour les anticorps monoclonaux dirigés contre MV-NP. Dans les données préliminaires non incluses ici, nous avons récemment découvert que l'anticorps monoclonal MV-HA mais pas l'anticorps monoclonal MVNP a presque complètement bloqué la liaison de l'anticorps sérique positif (MPR) à la bande protéique MPR sur immunoblot. Par conséquent, ces études indirectes suggèrent que les anticorps MPR dans les sérums autistes sont plus susceptibles d'être dirigés contre l'antigène MV HA. De plus, la bande de 73 à 75 kD de MPR ne contenait ni RV ni MuV car cette bande était immunonégative pour les anticorps monoclonaux de chacun de ces deux virus. Par rapport aux enfants autistes, les enfants témoins avaient de faibles niveaux d'anticorps MMR qui étaient immunonégatifs pour l'antigène MV-HA dérivé du MMR. Il semble donc plausible que les enfants autistes aient produit une réponse inappropriée ou anormale des anticorps au MDR dirigé contre l'antigène MV-HA. Sans aucun doute, davantage de recherches sont nécessaires sur ce sujet, mais nous sommes tentés de spéculer que l'immunorégulation défectueuse ou des facteurs immunogénétiques peuvent déterminer pourquoi seuls les enfants autistes produisent ces anticorps anormaux dirigés contre la protéine dérivée de la MPR (73-75 kD) qui semble être la Antigène MV HA. Alternativement, la différence entre les enfants autistes et témoins peut être due à une modification structurelle (ou mutation) du déterminant antigénique reconnu par les anticorps MPR. La vaccination avec des vaccins est la meilleure mesure préventive contre les infections mortelles disponible aujourd'hui pour l'humanité. Étant donné que les vaccins sont administrés à des sujets sains, presque exclusivement aux enfants, la sécurité des vaccins doit être aussi absolue que possible. Bien que l'équation risques-avantages favorise fortement la vaccination, il existe certains effets secondaires graves, quoique extrêmement rares, qui méritent une attention scientifique. Par exemple, une méningite aseptique [6] et une ataxie cérébelleuse [11] ont été décrites chez des enfants immunisés avec la MPR. Cependant, la base de la réaction négative des vaccins dans certains cas reste pratiquement inconnue. Il est tout à fait possible que les vaccins d'une petite population d'enfants prédisposés génétiquement réagissent de manière inappropriée, simplement en raison de leur système immunitaire immature ou d'autres facteurs de risque inconnus tels que les immunodéficiences, les allergies, les toxines chimiques ou le stress psychologique chronique [3]. .
Ces dernières années, le sujet de la vaccination-auto-immunité a retenu l'attention du public. Cela est probablement dû au fait que les maladies auto-immunes sont les manifestations les plus courantes des vaccinations [1, 13]. La MDR a été insinuée comme coupable de problèmes gastro-intestinaux chez certains enfants présentant des caractéristiques autistiques [22]. Environ la moitié des parents d'enfants autistes ont signalé une régression autistique après la vaccination MPR [17]. De plus, une association sérologique de MV et d'auto-immunité a été trouvée chez des enfants autistes qui n'avaient pas d'infection rougeoleuse de type sauvage mais avaient une immunisation MPR [17]. Et, comme décrit ici, les enfants autistes ont montré une corrélation sérologique entre MPR et auto-immunité cérébrale, c'est-à-dire que plus de 90% des sérums autistes positifs pour les anticorps MPR avaient également des auto-anticorps anti-MBP cérébraux. Il s'agit d'une observation plutôt intrigante en faveur d'un lien entre l'infection rougeoleuse atypique et l'autisme; Une infection atypique se réfère généralement à l'infection qui se produit en l'absence d'éruption cutanée. Une infection atypique à la rougeole en l'absence d'éruption cutanée et de symptômes neurologiques inhabituels a récemment été décrite pour suggérer l'existence d'une variante MV chez l'enfant et l'adulte [9]. À la lumière de ces nouvelles découvertes, nous suggérons qu'un pourcentage considérable de cas d'autisme peut résulter d'une infection atypique à la rougeole qui ne produit pas d'éruptions cutanées mais provoque des symptômes neurologiques chez certains enfants. La source de ce virus pourrait être une variante MV ou ce pourrait être le vaccin MPR. Scientifiquement, il est donc instructif de considérer ces deux possibilités et de les découvrir à travers la recherche expérimentale. Nous pensons qu'il s'agit d'un problème de santé publique extrêmement important, simplement parce que certains scientifiques nous ont récemment avertis de l'émergence d'un MV mutant qui provoque des maladies mortelles chez l'homme [9]. Si tel est le cas, de nouvelles stratégies de vaccination seront nécessaires pour lutter contre l'infection mutante par la rougeole. Alors que des recherches supplémentaires sont nécessaires pour établir un rôle pathognomonique pour MPR / MV, nous explorons actuellement le rôle de l'auto-immunité induite par le virus et nos futures recherches visent à caractériser la base moléculaire de l'immunité cellulaire et humorale aux antigènes viraux chez les enfants atteints de l'autisme.
source: www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12145534
Traduction de Nicoletta Protti et Claudio Andreini Di Vita, Cliva Toscane