Вакцинегат: полное секвенирование генома MRC-5, содержащееся в Priorix Tetra

Эти последние анализы стали возможными благодаря активному вкладу французских ассоциаций Ассоциация Либерте Информация Санте (АБИС), Национальная лига вакцинации (LNPLV) и Австралийская ассоциация Австралийская сеть вакцинных рисков (AVN) что мы благодарим.

Секвенсоры нового поколения стали инструментами выбора для углубленного анализа в области биологии и медицины, особенно точного. Эти инструменты позволяют использовать новый и более глобальный подход к ряду приложений, таких как секвенирование de novo, исследования метагеномики, эпигеномика, секвенирование транскриптома и повторное секвенирование генома.

Это последнее применение (повторное секвенирование) широко распространено в человеческой области как в исследовательских, так и в диагностических целях и состоит в секвенировании с помощью технологии NGS (Next Generation Sequencing) всего индивидуального генома для картирования одиночных нуклеотидных мутаций (SNP, произношение 'snip'), вставки и делеции более или менее длинных последовательностей происходили в определенных положениях генома и вариации в количестве копий частей генома / генов (CNV, варианты количества копий). 

Эта процедура полезна для понимания механизмов развития некоторых патологий, чтобы определить направления для будущего клинического лечения, например, в случае рака. С помощью этого метода, фактически, генетическое наследие больного раком может быть полностью декодировано в нормальной и опухолевой ткани, что позволяет понять, что изменилось в геноме, и, если возможно, вмешаться с целевыми протоколами.

Процедура повторного секвенирования требует, чтобы ДНК человека была механически разбита на маленькие фрагменты (400-500 пар оснований) и чтобы фрагменты были связаны с искусственными участками ДНК, называемыми адаптерами, которые позволяют связывать фрагменты ДНК человека на стеклянную поверхность, на которой затем считываются основания (A, C, G, T). Основания ДНК читаются путем включения химических реакций нуклеотидов, меченных флуоресцентными молекулами. Миллионы последовательностей (считываний), полученных в результате секвенирования на поверхности стекла, затем сопоставляются с эталонным геномом человека с помощью соответствующего программного обеспечения, и поэтому все варианты, присутствующие в анализируемом геноме, идентифицируются относительно эталона. 

Эта же процедура была выполнена для человеческого генома, присутствующего в партии Priorix Tetra. п. A71CB256A, геном, принадлежащий клеточной линии MRC-5 (эмбрионального происхождения); Работа проводилась в компании, расположенной в США, которая регулярно занимается анализом геномов человека путем повторного секвенирования. *

* Название лаборатории, которая провела этот анализ, будет включено в следующее заявление, которое мы передадим в прокуратуру в Риме, а также в итальянские и европейские контрольные органы. Реалии, которые отражают результаты анализов, финансируемых Corvelva, также будут немедленно обновлены с этими удивительными результатами. Мы не отрицаем, что, как родители, в первую очередь, мы огорчены результатами, о которых мы сообщаем ниже - если того, что мы обнаружили до сих пор, было недостаточно.

Результаты

Было обнаружено, что эталонный геном человека покрыт показаниями, полученными из ДНК вакцины, на 99.76%, следовательно, почти для всей его полноты. Таким образом, человеческая эмбриональная ДНК, представленная в этой вакцине, представляет собой полный индивидуальный геном или присутствует в геномной ДНК-вакцине всех хромосом индивидуума мужского пола (и фактически плод, из которого происходит линия клеток MRC-5, является мужским).

Ниже приведены результаты анализа различных типов вариантов в отношении эталонного генома человека.

Варианты с одним нуклеотидом (SNP) и короткие вставки / делеции (InDels)

Варианты отдельных оснований ДНК (SNP, произносится как «snip») представляют собой полиморфизмы, то есть вариации генетического материала, переносимые одним нуклеотидом. InDels, с другой стороны, представляют собой небольшие вставки и делеции длиной менее 50 пб и представляют собой другой класс геномных вариантов в геноме человека.

В геноме вакцины человека было идентифицировано в общей сложности около 3.6 млн. SNP (из которых 98.31% уже занесено в общедоступную базу данных dbSNP и 61.805 804 новых или оригиналов этой ДНК) и около 89.42 тыс. InDels (из которых 85.106% уже сообщается в dbSNP и XNUMX новых). 

Количество SNP соответствует тому, что сообщается в литературе в «типичном геноме человека», в то время как показатели в большей степени, чем сообщается «Консорциумом проекта 1000 геномов», или 800 тысячам по сравнению с 600 тысячами.

CNV (варианты количества копий) и SV (структурные варианты)

Варианты в количестве копий (CNV) являются геномными вариантами из-за различий в количестве копий относительно больших фрагментов (более 50 п.н.) между отдельными геномами. Существует два типа CNV: тип «усиление» (усиление копий) и тип «потеря» (потеря копий). 218 CNVs были обнаружены в геноме вакцины человека, 82 из которых имеют тип "усиления" (охватывающий часть генома, равную приблизительно 6.9 миллионам пар оснований) и 136 "CNVs" типа "потери" (которые покрывают часть генома около 70 миллионов баз).

Как описано Консорциумом проекта 1000 геномов в «Глобальном справочнике по генетическим вариациям человека (Nature, vol. 526, 10)», типичный геном человека содержит от 2015 2.100 до 2.500 крупных вариантов, включая:

• 1.000 больших удалений
• 160 вариаций количества копий (CNV)
• 10 разворотов

которые влияют в целом, учитывая также вставки, на 20 миллионов оснований последовательности.

Как наблюдается для коротких INDEL, даже в случае больших вставок и делеций, геном вакцины, следовательно, не соответствует «нормальному» геному человека, будучи гораздо более «перестроенным», чем геном обычного индивида.

Круговая визуализация генома (цирковой сюжет)

Ниже представлено графическое представление вакцинного генома, называемого «цирковой сюжет» (который обычно используется для представления повторно секвенированного генома), наряду с другим, который представляет повторно секвенированный геном, начиная с ДНК, выделенной из крови. здорового человека - «нормальный» геном:

Значение различных концентрических кругов

7) Самое центральное кольцо представляет собой вывод SV (структурных вариантов) в экзонических и сплайсинговых областях. МЕЖДУ (оранжевый, транслокации), INS (зеленый, вставки), DEL (удаления, серый), DUP (дублирование, розовый) и INV (инверсия, синий).

6) Шестое кольцо представляет собой вывод CNV (варианты в количестве копий). Красный означает получение кусков ДНК, а зеленый означает потерю.

5) Пятое кольцо представляет долю SNP в гомозиготности (оранжевый) и в гетерозиготности (серый) в стиле гистограммы.

4) Четвертое кольцо (зеленое) представляет плотность snp в стиле «дисперсионный график».

3) Третье кольцо (черное) представляет плотность INDEL в стиле «графика рассеяния».

2) Второе кольцо (синее) представляет охват чтений в стиле гистограммы.

1) Внешний круг (первый круг) - это номер хромосомы.     

Можно также провести грубое сравнение между ДНК плода и клеточной ДНК HeLa, иммортализованной клеточной линией, также используемой при производстве вакцины против полиомиелита.

Следует подчеркнуть, что транслокации клеток HeLa, представленные в цирковом графике линиями ядра, относятся ко всему геному (следовательно, к кодирующей и некодирующей части), тогда как в случае фетальных вакцинных клеток они относятся только к кодирующим генам.

Необязательно быть ученым, чтобы понять с первого взгляда, что геном вакцины - это не геном, который можно определить как «нормальный». Переплетающиеся в центре кружков оранжевые линии, которых не так много в соответствующем кольце «нормального» генома, уже заставляют нас догадываться об аномалии этого генома.

выводы 

Геномная ДНК человека содержится в вакцине Prorix. п. A71CB256A является явно аномальным, демонстрируя важные несоответствия в отношении типичного генома человека, то есть генома здорового человека. Существует множество неизвестных вариантов (не отмеченных в публичных базах данных), и некоторые из них находятся в генах, участвующих в раке. Также очевидно, что аномальным является избыточный геном, который показывает изменения в количестве копий (CNV) и структурных вариантов (SV), таких как транслокации, вставки, делеции, дупликации и инверсии, многие из которых включают гены.

Потенциальный вклад многих вариантов (не представленных в научной литературе и в публичных базах данных) в фенотип клеток, используемых для роста вакцинных вирусов, неизвестен.

Внутри PDF вы найдете все идеи, связанные также с последствиями для здоровья и переписки с EMA.

 Скачать: CORVELVA-Ri-генома секвенирование-человек-Приорикс-Tetra.pdf