Queremos hacer un balance de la situación junto con usted. Desde julio de 2018 hasta hoy han pasado 8 meses y en estos meses hemos logrado resultados extremadamente satisfactorios. Hemos presentado un programa de investigación y en lo que respecta al análisis de vacunas, podemos hacer un primer punto de la situación, con los objetivos alcanzados, los que están en la fase de finalización y los que aún están en la etapa de planificación.

Comenzamos esta actualización diciendo que los análisis por estándar de 2 compuestos para cada vacuna han sido confirmados, utilizando estándares de control certificados con una concentración del orden de microgramos / ml. Los compuestos que hemos elegido se encuentran entre los conocidos por su perfil de riesgo crítico. Estamos hablando de una cantidad acumulativa, es decir, en total, entre los confirmados como identidad y los que se identificarán, que se puede estimar en el orden de 50 microgramos / ml, en contraste con las pautas EMA / FDA.

¡Estas confirmaciones dieron resultados positivos, por lo tanto, confirman completamente el método de análisis! Las contaminaciones observadas se deben probablemente a fenómenos y variables asociadas con el proceso de fabricación. Lo que se ha observado durante los estudios es una variación a largo plazo de esta composición que lleva a suponer que existen procesos que son difíciles de controlar dentro del proceso general de procesamiento del producto.

Los análisis realizados permitieron concluir los siguientes pasos:

• Evaluación de la conformidad de la composición como se indica en la hoja de datos de la vacuna.
• Detección de contaminaciones químicas, de proteínas / péptidos y material genético.
• Estudio de confirmación de compuestos objetivo (químicos y proteicos) con estándares de control certificados

Las siguientes vacunas han sido analizadas "completamente":

• Infanrix Hexa - GlaxoSmithKline Biologicals sa
• Priorix Tetra - GlaxoSmithKline SpA
  
• Hexyon - Sanofi Pasteur Europa
• Gardasil 9 - Vacunas MSD

Estas otras vacunas se analizaron como detección inicial:

• Vacuna contra el sarampión viva BP - Grupo Poonawalla (Profarma AG, Baar)
• MMR vax Pro - Vacunas MSD, Francia
• PolioInfanrix - GlaxoSmithKline, Bélgica
• Fluad - Seqirus Srl, Siena
• Vivotif - PaxVax, Reino Unido

Tecnologías utilizadas

El estudio se articuló sobre:

Análisis de impurezas y contaminaciones químicas y proteicas.

• El sistema de análisis LC-SACI / ESI-MS asociado con la innovadora plataforma SANIST se utilizó tanto para realizar una detección de identificación inicial de las vacunas de interés como para confirmar con los estándares de control, con un límite mínimo entre los nanogramos y microgramos / dosis
• La tecnología MALDI-TOF-MS se ha utilizado para estudiar las macromoléculas insolubles presentes en las vacunas.

Análisis de material genético.

• Prueba de presencia de ácidos nucleicos (ADN / ARN) de origen humano y animal y de microorganismos (virus, bacterias) utilizando el método de secuenciación de próxima generación, que permitió cuantificar de manera altamente específica y precisa la secuencia del material genético contenido en las vacunas. examinado

Análisis cuantitativo de metales.

• La tecnología ICP-MS ha permitido cuantificar los metales presentes en las vacunas con un límite mínimo de 5 ng / dosis.

Análisis de contaminaciones químicas y proteicas.

Después de un examen inicial que identificó cientos de señales químicas en las vacunas, Las confirmaciones se realizaron utilizando 2 compuestos estándar por vacuna, utilizando estándares de control certificados, elegidos entre aquellos conocidos por su perfil de peligro crítico y cantidad no residual (de modo que puedan considerarse componentes de las vacunas, por lo tanto, se incluyan en la hoja de datos técnicos y se cuantifiquen).

Estas confirmaciones han dado resultados positivos, por lo que confirman plenamente el método de análisis. Por ahora se han realizado sobre solo dos compuestos por razones puramente económicas, de hecho este estudio no es exhaustivo porque está limitado por el considerable costo de la investigación pero hemos optado por identificar los estándares que tienen mayor impacto en cuanto a limitaciones regulatorias y también es cierto que este tipo de investigación a fondo dependería de nosotros.

Las contaminaciones observadas se deben probablemente a fenómenos y variables asociadas con el proceso de fabricación. Lo que se ha observado durante los estudios es una variación a largo plazo de esta composición que lleva a suponer que existen procesos que son difíciles de controlar dentro del proceso general de procesamiento del producto. Teniendo en cuenta los factores analíticos habituales, se puede suponer que la concentración es del orden de microgramos / ml. En cuanto a la cantidad acumulada, es posible estimar sobre la base de una evaluación semicuantitativa (dado que no se conoce la mayoría de los compuestos) que los contaminantes son del orden de 50 μg / ml. Esto es importante porque la directriz EMA / FDA es clara a este respecto. Las contaminaciones no deben estar presentes (por debajo del límite de detección) o, si lo están, deben estar bien caracterizadas y probadas para aplicar métodos apropiados para reducirlas lo más posible. En nuestro caso, los contaminantes que hemos encontrado no están por debajo del límite de detección del instrumento (ng / mL) y, por lo tanto, en nuestra opinión, el fabricante no está aplicando ningún método de purificación. En cuanto a la presencia de virus adventicios, el problema no existe, porque deben estar completamente ausentes.

• EN CURSO: los análisis de confirmación entre laboratorios de estos compuestos están en curso.
  Los compuestos identificados por los estándares serán reconfirmados con la misma tecnología en otros laboratorios. Uno de los objetivos que nos hemos fijado es coordinar esta acción también a través del apoyo de asociaciones internacionales.
• EN CURSO - Estudio de la cinética de precipitación de antígenos unidos a aluminio.

Análisis metagenómico.

• EN CURSO: análisis con estándares adicionales de control de ADN y ARN de otro lote por vacuna.
  Desde el comienzo de este proyecto, nos ha quedado claro que los análisis, para cumplir con los requisitos necesarios de repetibilidad y precisión de los datos, tenían que llevarse a cabo con instrumentación avanzada y monitorear cualquier diferencia entre y entre diferentes lotes. A medida que avanzamos con las investigaciones, se analizan continuamente otros lotes, obviamente limitados a los costos y la disponibilidad de los productos.
• EN CURSO - Análisis de secuenciación del genoma de ADN fetal de la línea celular MRC-5.
  Ya en el primer examen tuvimos la oportunidad de confirmar por estándar que las líneas diploides utilizadas eran MRC-5, como se indica en la hoja de datos. Queremos profundizar el estudio de esta línea celular también en virtud del hecho de que está presente en cantidades considerables y de un tamaño absolutamente considerable.
• EN CURSO - Estudio de variantes menores (quasiespecies) de virus de sarampión, paperas y rubéola.
  En comparación con el primer informe de julio de 2018 (https://goo.gl/cSspVH) comisionamos el estudio en profundidad de las variantes menores ya que las mutaciones de los virus vacunales atenuados no fueron las únicas encontradas. Este elemento también plantea enormes dudas sobre la eficacia y seguridad de la vacuna. El resultado tomará más tiempo que los otros informes porque la verificación de las secuencias de los diversos mutantes debe realizarse manualmente.
• EN CURSO - Análisis de confirmación interlaboratorio
  Hemos identificado laboratorios extranjeros y nacionales a los que les hemos encargado la replicación de los análisis por estándar. Este resultado estará disponible en breve.

Proyectos bajo evaluación

Estudio de la potencia de los antígenos de vacuna: este estudio debe llevarse a cabo en un centro acreditado por organismos reguladores para el estudio preclínico de vacunas. El objetivo es verificar si los antígenos de la vacuna son capaces de producir o unirse a anticuerpos específicos (en teoría se supone que estos anticuerpos son protectores, pero este análisis no permite demostrar que la vacuna puede proteger contra la enfermedad). El costo de este paso podría ser considerable, por lo tanto, el proyecto es hipotético por ahora.

Descargar: CORVELVA-informe-de-resultados-ottenuti.pdf