Contaminazione da micoplasma e attività immunomodulatoria virale: le cellule dendritiche aprono il vaso di Pandora

Durante le indagini in vitro sull'interazione del virus della peste suina classica (CSFV) - un patogeno virale immunosoppressivo - con le cellule dendritiche derivate da monociti (MoDC), è stato trovato un fattore solubile con una forte attività antiproliferativa per i linfociti T. Questa attività, con una diluizione inibitoria del 50% (ID(50) di 10(3)-10(7), è stata indotta dopo l'infezione del virus di monociti differenziati in DC. Questa attività, con una diluizione inibitoria del 50% (ID(50)) di 10(3)-10(7), è stata indotta dopo l'infezione virale dei monociti che si differenziano in DC. L'inattivazione UV dei surnatanti e gli esperimenti di blocco con un anticorpo monoclonale contro la proteina dell'involucro E2 del CSFV hanno inizialmente indicato una dipendenza dal virus. Tuttavia, ulteriori indagini, tra cui esperimenti di filtrazione e centrifugazione e trattamento antibiotico, hanno dimostrato il coinvolgimento del micoplasma. Ciò è stato confermato da una colorazione Hoechst 33258, dalla PCR e da colture di micoplasmi: il micoplasma hyorhinis è stato identificato come contaminante. L'identificazione della presenza di un micoplasma è avvenuta in condizioni in cui gli stock virali originali preparati in cellule SK6 erano negativi per la presenza di micoplasmi utilizzando i test sopra citati. Inoltre, il passaggio convenzionale del virus sulle cellule SK6 utilizzate a questo scopo non ha rivelato alcun micoplasma. È stato necessario il passaggio del virus in MoDC anziché in cellule SK6 per evidenziare la contaminazione. Tre passaggi dei supernatanti antiproliferativi su colture MoDC hanno aumentato l'ID(50) di 10(3) volte; solo quando sono stati utilizzati questi supernatanti derivati dalle MoDC il contaminante micoplasma è stato rilevabile anche sulle cellule SK6. In conclusione, questi dati dimostrano che l'analisi regolare di linee cellulari e stock di virus per la ricerca di micoplasmi non ne identifica necessariamente la presenza e che l'applicazione del passaggio in colture MoDC potrebbe rivelarsi un aiuto per identificare livelli inizialmente non rilevabili di contaminazione da micoplasmi.